正确配置***液相色谱仪流动相的四个要点
发布时间：2019-04-14 03:41:53
正确配置***液相色谱仪流动相的四个要点
***液相色谱仪的分离原理，主要依靠流动相和固定相对样品的吸附和脱附作用，那正确配置流动相，对于实验数据和分离效果有着至关重要的意义。
一、流动相配置注意事项
一般来说，溶剂的混合按体积比（V/V）或重量比（W/W）进行。溶液的体积因温度而变化，所以按重量比混合配置流动相，样品测定的重复性较好，但是操作繁琐，通常多为体积混合。
体积混合有三种方式，例如50%***水溶液：
方式（1）：可以用量筒量取***500ml，再量取水500ml，两种液体在瓶内充分摇晃混合。
方式（2）：可以先取500ml***到1L容量瓶中然后用水定容。
方式（3）：可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用***定容。
这三种方式配置得到的流动相组成都是不同的，即使不考虑其他方面因素，保留时间也不会相同。一般情况推荐使用方式（1） 来配置流动相。
***如***，***必须为色谱级纯，其他***也尽量使用色谱级纯，***标签上都会标有色谱级或HPLC等字样。水为超纯水或者直接购买质量有保证的纯净水。
三、调节流动相pH值
采用反相色谱法分离弱酸（3≤pKa≤7）或弱碱（7≤pKa≤8）样品时，通过调节流动相的pH值，以***样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子***技术。
（1）对于弱酸，流动相的pH值越小，组分的k值越大，当pH值远远小于弱酸的pKa值时，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和1%***。
（2）对于弱碱，情况相反。分析弱碱样品时，通常在流动相中加入少量弱碱，常用50mmol/L磷酸盐缓冲液和30mmol/L三乙胺溶液。流动相中加入有机胺可以减弱碱性溶质与残余硅醇基的强相互作用，减轻或消除峰拖尾现象。所以在这种情况下有机胺（如三乙胺）又称为减尾剂或除尾剂。
四、含缓冲盐流动相的配制
配置缓冲盐使用的盐***也尽量使用色谱级纯，称样要精准，为了达到要求，选用合适量程的天平且每天使用前对天平校正。按要求配置好以后必须通过0.45μm或0.22μm滤膜过滤并超声脱气20min以上。注意：缓冲盐要临用新配。
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